Presencia de Phomopsis sp., agente causal del tizón del orégano (Origanum vulgare) en Córdoba, Argentina

El orégano (Origanum vulgare L) ocupa el primer lugar en la producción de especias en Argentina. Se cultiva principalmente en las provincias de Córdoba, Mendoza, San Juan y San Luis (COFECYT,  2009).   El Valle de Traslasierra, ubicado al oeste de Córdoba, es la principal zona de producción y comercialización de hierbas aromáticas y medicinales. Las variedades Criollo, Negrito y Mendocino son, históricamente, las más cultivadas. Sin embargo, las dos últimas están paulatinamente dejándose de utilizar como consecuencia de haber perdido rendimiento y calidad en el producto final (Suarez, 2005).En el año 2009, 2010, se observaron varios patógenos en los cultivos de la zona. Así, se pudo evidenciar la presencia de Fusarium spp., Rhizoctonia sp., Septoria sp., roya y un atizonamiento de plantas, objeto de este estudio (Arguello et al, 2012).En Argentina se describen los siguientes patógenos en el cultivo de orégano: Alternaria alternata (Jauch y Gally, 1985; Madia, et al., 2008), Stemphyllium sp. (Madia, et al, 2008), Rhizoctonia solani (Alcoba et al, 2005), Fusarium spp. (Gaetán et al., 2007), Colletotrichum sp. (Perelló y Dal Bello, 1995) y Curvularia sp. (Sandoval et al., 2002). También se ha observado la presencia de roya (Puccinia  sp.) en las hojas (Madia y Gaetán, 2008), oidio (Wolcan, 2009), y síntomas de virosis (Feldman & Gracia, 1977). Además, el cultivo es afectado por varias especies de nematodos (Doucet et al., 2008).Se planteó como objetivo de este trabajo determinar el agente causal del tizón en los cultivos de orégano, en el Valle de Traslasierra, provincia de Córdoba, Argentina, para poder elaborar estrategias efectivas de manejo de la enfermedad.En el año 2010 se recolectaron plantas de orégano con manchas necróticas en las hojas, tallos y flores, en dos lotes cultivados con la variedad Negrito, en el Departamento San Javier (31° 56′  S, 65° 12′ O), al oeste del Valle de Traslasierra, provincia de Córdoba. Tallos con manchas de color castaño oscuro fueron colocados en cámara húmeda en condiciones de laboratorio, bajo iluminación natural y durante cinco días, para hacer una observación visual de los síntomas. Además, se realizaron aislamientos a partir de las plantas con síntomas de tizón. Los trozos de tejidos obtenidos de las manchas necróticas de ramas y pecíolos fueron agitados en  agua esterilizada con 1 mL de  Tween 20 %, en un agitador rotativo a  4000 rpm, durante 15’  y a 30 ºC. Este tratamiento fue realizado para limpiar el material de las gotas de aceites que posee y que llevan microorganismos que contaminan los medios de cultivos. Posteriormente, los trozos fueron desinfectados  con etanol 70%, durante un minuto y con una solución de hipoclorito de sodio comercial (50 g/L de Cl activo) al 10 %. Luego, se sembraron en cajas de Petri con agar papa glucosado (APG), 2%, pH 5,5. Las cajas se mantuvieron en condiciones de laboratorio con aproximadamente 23±2ºC bajo iluminación natural, durante  10-15 días, para permitir la formación de picnidios, a partir de los cuales se obtuvieron cultivos puros. El hongo fue identificado sobre la base de sus características morfológicas (Sutton, 1980).Para realizar las pruebas de patogenicidad se utilizaron conidios obtenidos de los picnidios de 10 días, crecidos en APG 2%, pH 5,5. Una suspensión de 2x105 conidios alfa/mL de agua esterilizada se pulverizó hasta punto de goteo sobre las ramas de ocho plántulas de orégano de 60 días, con cuatro ramas cada una, provenientes de cultivo de meristemas del Laboratorio de Biotecnología de nuestra Facultad. Como control se utilizó igual número de plántulas. Previamente se realizaron heridas en los tallos con una aguja hipodérmica esterilizada. Las plántulas se colocaron en una cámara de crecimiento a 22±1,5ºC  y con 12 horas de luz fluorescente y 12 horas de oscuridad. Los controles se pulverizaron con agua esterilizada y se acondicionaron igualmente que el material inoculado. La presencia de la enfermedad se evaluó por la sintomatología en las ramas, pecíolos y hojas de las plántulas a los dos meses. El hongo fue reaislado de sectores necrosados de las ramas en APG, 2%, pH 5,5.Otro ensayo consistió en colocar sobre un cultivo del patógeno en APG 2 %, pH 5,5, trozos de 2 cm de ramas de plantas de orégano sanas de la variedad “negrito”, provenientes de cultivo de meristemas. Para la desinfección del material se siguió la misma metodología descripta anteriormente. Luego los trozos se colocaron en las cajas de Petri sobre el cultivo del hongo y fueron mantenidas en una cámara de crecimiento a 22±1,5ºC y con fotoperíodo de 12/12 horas luz/oscuridad durante 5-10 días. Aislamientos del patógeno, de siete días crecidos en APG 2%, pH 5,5, fueron remitidos al Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola (IMYZA), perteneciente al Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) Castelar, y al Instituto de Botánica Spegazzini, de la Facultad de Ciencias Naturales y Museo, de la Universidad Nacional de La Plata, Argentina, para la determinación del agente etiológico.El signo del patógeno, a los cinco días de colocados los trozos de ramas en cámara húmeda, no se hizo visible. En los aislamientos realizados en cajas de Petri aparecieron, a los 10 días, picnidios prominentes y con cirros.Con aguja histológica esterilizada se tomaron cirros y se los plaqueó sobre APG, 2%, pH 5,5. El hongo comenzó a crecer a los 2 días y la presencia de picnidios se observó a los 10 días de la siembra. El micelio blanco al comienzo, con áreas concéntricas,  tomó color castaño grisáceo y en el reverso de la caja se observaron zonas oscuras. Los picnidios negros, globosos se distribuyeron en toda la superficie, a veces solitarios y otras, agrupados. A los 3-4 días aparecieron exudados cremosos. Estos exudados sólo presentaron conidios alfa unicelulares, hialinos, bigutulados.En las pruebas de patogenicidad, a los 15 días de inoculadas, se observó en las plantitas, la presencia de manchas castaño oscuro sobre las ramas. Por el pequeño tamaño de las plantas y antes de que murieran, se decidió cortar segmentos de las ramas y sembrarlos en APG 2%, pH5,5. Creció sobre este material, micelio blanco, luego oscuro y posteriormente aparecieron los picnidios del patógeno. En los trozos de tallo sembrados sobre cultivos del hongo se observó abundante fructificación. Picnidios oscuros, globosos crecieron sobre el material a los cinco días de incubados. Las observaciones realizadas en IMYZA-INTA, Castelar y en el Instituto de Botánica Spegazzini, determinaron que los aislamientos correspondían al género Phomopsis sp. Debido a la poca bibliografía existente para la determinación de especies de Phomopsis, la última de Punithalingam y Spooner (2002), y a la gran cantidad de especies determinadas hasta el momento (970 especies), se hace necesario realizar una determinación a nivel molecular (Barreto, D y Arambarry, A; 2011. Comunicación personal).Los resultados de este trabajo indican que Phomopsis sp. es el patógeno que produce atizonamiento en las plantas de orégano en el Valle de Traslasierra, provincia de Córdoba, Argentina.Al no haberse encontrado antecedentes acerca de la presencia de este patógeno sobre el cultivo de orégano, en nuestro país, se deberá realizar un estudio taxonómico más detallado para la determinación de la especie.